Обоснование вирусной природы псориаза
Как часто возникает псориаз? Кто из современников болеет этим заболеванием? Эти и другие вопросы нередко возникают при беседе с больным. Видя проявления болезни у себя, больной замечает, выразительно разводя руками: эта болезнь только у меня? Однако это не так. Пусть это успокоит каждого больного псориазом, он не один.
В свое время русский путешественник Н.Н. Миклухо-Маклай в книге «Путешествие на берег Маклая» среди наиболее распространенных кожных заболеваний у папуасов упоминал и семейный псориаз. Он писал, что «псориазис встречается очень часто. Так как эта болезнь передается по наследству, то ее можно встретить иногда даже у новорожденных… С годами она довольно скоро распространяется по всему телу. Псориазис здесь почти не считается болезнью: мужчины, больные псориазисом, выбирают себе нередко жен, пораженных той же болезнью, и естественно, поэтому у большинства новорожденных видны следы этого заболевания».
А что же говорят ученые, используя современные методы, изучая вопрос о природе псориаза? Большой вклад в выяснение причины этого дерматоза внесли отечественные дерматологи.
В 1937 г. на кафедре кожных и венерических болезней Минского медицинского института была проведена работа по лечению псориаза экстрактом из его чешуек, полученных по методу Иогановича. Подобная работа была сделана также и в Одессе З.С. Крицманом, применявшим глицериновый экстракт из чешуек.
Эти работы исходили из попыток клинически обосновать инфекционную природу псориаза. A. Линдерберг (1925) обнаружил в протоплазме клеток эпидермиса при начальных формах псориаза круглые или овальные включения. По его мнению, при псориазе наблюдается набухание ацидофильных ядрышек и частое расположение их в протоплазме клеток или же их выход вне клеток.
В 1939 г. Б.С. Ябленик привил сыворотку и кровь больных псориазом 62 морским свинкам, в результате чего через 5-60 дней после прививок у 14 свинок на коже образовалась сыпь, напоминающая псориатические папулы. Взяв у 3 из 14 опытных морских свинок кровь из сердца, Б.С. Ябленику удалось воспроизвести на других морских свинках дерматоз, напоминающий псориаз, хотя до сих пор многими учеными различных стран оспаривается экспериментальное воспроизведение псориаза на животных. Указанные эксперименты Б.С. Ябленика были описаны в его докторской диссертации, выполненной в стенах Белорусского государственного медицинского университета. Кроме того, на эту тему была опубликована работа в сборнике «Практическая дерматология» (1940).
Важные работы по исследованию вирусной природы псориаза принадлежат А.Ф. Ухину, которому удалось обнаружить элементарные тельца не только в мазках-отпечатках из скарифицированных псориатических папул, но и в мазках из органов кроликов, инфицированных кровью больных псориазом. Кроме того, он выделил вирус псориаза и культивировал его на курином эмбрионе.
Изучая вопрос вирусной этиологии псориаза, Б.М. Гинзбург удалось, так же как и А.М. Кричевскому с соавторами, обнаружить иммуногенные свойства крови у больных псориазом. А.Я. Прокопчук, З.И. Орлова и Л.Г. Федорова пользовались реакцией связывания комплемента. Антигены готовились не из крови, а из чешуек и из осадка мочи больных псориазом. Резко положительный результат реакции Борде – Жангу с антигенами был получен почти у 75 % больных, слабо положительный или отрицательный – у 25 %. Однако резко положительный и слабо положительный результаты с собственными антигенами были получены и в сыворотках у одной трети свободных от псориаза больных, т. е. эта реакция, как правильно отметил А.М. Кричевский, носила групповой характер. Наиболее чувствительным оказался антиген, изготовленный из осадка мочи больных псориазом.
Изучались также мазки-отпечатки из скарифицированных псориатических папул. Эти исследования подтвердили нахождение в эпителиальных клетках, вне клеток, в крови больных псориазом темных, круглых, овальных или бесформенных, в виде песчинок, образований, импрегнирующихся серебром по методу Морозова. Эти включения были засняты авторами на многочисленных препаратах. Результаты положительных находок слишком часты, чтобы думать, что эти зернистые образования в клетках и вне их являлись именно элементарными тельцами вируса псориаза. Кроме того, включения, заснятые А.М. Кричевским и его сотрудниками, более всего похожи на зернистые массы (возможно, артефакты) на особых биологических препаратах, обрабатываемых серебром.
По мнению исследователей, включения являются не элементарными тельцами псориаза, а укрупненными частицами клеточной протоплазмы, которая дегенеративно изменена. Ведь и сам А.М. Кричевский обнаружил подобные «элементарные тельца» при вульгарной пузырчатке и герпетиформном дерматозе Дюринга. Изучая мазки-отпечатки, окрашенные по методу Морозова, ученые нашли включения и при псориазе, и при сифилисе в эпителии влагалища, и при язвах голени, в эпителии мочевых осадков больных не псориазом, и в эпителии нормальной скарифицированной кожи и т. д.
Пользуясь электронным микроскопом «ЭМИ-2», позволяющим получать изображения, увеличенные в 4000-22 000 раз, А.Я. Прокопчук с соавторами обнаружили эти элементарные тельца без обработки серебром или красками. Элементарные тельца псориаза имели в диаметре 120–140 миллимикрон, т. е. их размер был сопоставим с размером вируса свинки человека. Причем все включения овальной формы имели почти одну и ту же величину. Подобно находкам А.Ф. Ухина и А.М. Кричевского, эти элементарные тельца имеют больше оснований считать за вирус псориаза, так как препараты для съемок в электронном микроскопе не обрабатывались серебром и не вносили в них никакие краски, которые могут дать осадки с любыми белковыми веществами. Такие «элементарные тельца» были найдены и у контрольных больных. Следовательно, заключают Прокопчук и его коллеги, это белковые частицы, а не вирус, что и до сих пор остается спорным.
Л.Г. Федорова провела комплексное морфологическое, гистохимическое, экспериментальное и серологическое исследование 100 больных псориазом с целью изучения данных, доказывающих вирусную природу заболевания. Проводилось исследование на элементарные тельца методом мазков-отпечатков из скарифицированных псориатических папул в прогрессирующей стадии заболевания. Гистологические исследования 20 биопсированных папул обнаружили увеличение количества и размеров ядрышек. При заражении морских свинок и кроликов в тестикулы кровью больных псориазом эмульсией из папул исследовательнице удалось воспроизвести клиническую картину псориаза у лабораторных животных. При использовании РСК по методу В.И. Иоффе на холоде с антигеном, приготовленным из псориатических чешуек, антиген из чешуек оказался неспецифичным. Число положительных реакций у контрольной группы было несколько большим, чем у больных псориазом.
Л.Г. Федорова правильно подчеркивает, что исследования в этом направлении необходимо продолжать с применением новейших вирусологических методов исследования и использования электронного микроскопа.
И.М. Щербаков считает, что положительные реакции преципитации или связывания комплемента при псориазе не указывают на скрытую псориатическую инфекцию, так как положительный результат получается у 6-11 % здоровых людей и больных не вирусными заболеваниями.
Г.Н. Гнуздев, Ф.М. Патрушев, Г.А. Шеленков провели вирусологические исследования крови и содержимого кантаридиновых пузырей у 44 больных псориазом. С целью накопления возбудителя содержимое пузырей и кровь троекратно пассировали на первично трипсинизированную культуру клеток и почек эмбриона свиньи. При всех пассажах цитопатического действия не наблюдалось. При микроскопировании препаратов с клетками отмечена выраженная дегенерация во всех пассажах как в опыте, так и в контроле: лизис части клеток и появление в цитоплазме оставшихся клеток большого числа вакуолей. По мнению авторов, подобную дегенерацию нельзя считать специфической. Реакции диффузной преципитации в геле, проведенные с антигенами (содержимое пузырей, сыворотка крови больных) и антителами (сыворотка крови выздоравливающих), были отрицательными.
Несмотря на сложность проблемы и неоднородность результатов, полученных различными исследованиями, имеются определенные доказательства, позволяющие говорить о вирусной природе псориаза.
Е.Л. Гольдштейном проводилось Всесоюзное анкетирование ведущих дерматологов страны по ряду важнейших вопросов дерматологии. Из 37 опрошенных специалистов 15 высказалось в пользу инфекционного, в частности вирусного происхождения псориаза.
ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ИНФЕКЦИОННЫЙ ХАРАКТЕР ПСОРИАЗА
Исследования последних лет свидетельствуют о вероятной роли вирусов в развитии псориаза. Многие исследователи искали и ищут возбудителя заболевания. При этом в псориатических высыпаниях в различные десятилетия XX в. обнаружены кокки, грибы, спирохеты, различные включения.
В литературе периодически дискутируется вопрос о возможности передачи псориаза от больного к здоровому человеку. Профессор А.Ф. Ухин описывал случаи появления псориаза в нескольких семьях. В первом случае после того, как за детьми ухаживала няня, страдавшая этим заболеванием, во втором – после пользования постелью больного.
Г. Нобль сообщил о заболевании, которое развилось вслед за оспенной вакцинацией с «ручки на ручку», и к подобного рода случаям присоединяет наблюдение о появлении псориаза после татуажа.
Профессор С.И. Довжанский наблюдал больного, у которого можно было заподозрить «заражение». На курорт для лечения мацестинскими ваннами приехали отец и сын, больные псориазом, которые остановились на частной квартире. Через некоторое время у хозяина квартиры на внутренней поверхности бедер возникли папулезные высыпания, покрытые серебристо-белыми чешуйками. При гистологическом исследовании были обнаружены типичные для псориаза изменения. В результате был установлен диагноз: псориаз.
Из собственной практики в пример можно привести больную К., 23 лет, у которой через 2–3 месяца возникли проявления псориаза после ночного отдыха на одной койке с больной студенткой (во время совместной учебы в институте), страдавшей псориатической субтотальной эритродермией. Вторая больная В., 69 лет, в течение 7 лет страдает варикозным расширением вен голеней, осложненным трофическими язвами и склонностью к непереносимости антибиотиков. После трехкратного пребывания в детском дерматологическом стационаре, где большинство больных лечилось от псориаза, у нее на локтевых и коленных суставах появились типичные псориатические высыпания (она помогала детям наносить мазь на псориатические участки). Подобного заболевания ни у кого в трех поколениях родственников не отмечено.
Псориаз – это заболевание с неимоверно большим числом эпидермальных митозов, связанных с быстрым развитием и, следовательно, укорочением времени перехода в эпидермис. Клинически не пораженная псориазом кожа ненормальна. Уровень ДНК синтеза увеличен как in vitro, так in vivo.
В основном известно, что склонность к псориазу наследуется. О семейных случаях заболевания псориазом сообщалось при исследованиях населения и близнецов.
Норвежскими учеными были обнаружены субклеточные частицы с вирусоподобной морфологией в псориатических бляшках, моче и крови больных псориазом, а также в среде роста клеток, культивируемых из псориатических поражений. Частицы продуцируются клеточной культурой в течение длительного времени культивирования без потребности в специальной индукции.
Было выявлено, что поверхность частиц неровная, отчетливо видны шипы. Электронно-микроскопическими методами показано, что внутренняя структура их гетерогенна. Меньшее количество частиц, которые авторы считают зрелыми вирионами, состоят из внутренней электронно-плотной сердцевины, окруженной менее плотным слоем. Второй слой с меньшей плотностью находится непосредственно под неровной наружной поверхностью. Частицы, обнаруживаемые внутри клетки, имеют большое сходство по морфологии с мышиным ретро-вирусом типа А, в то же время как некоторые внеклеточные частицы напоминали ретровирусы типа С.
Результаты, полученные при изучении белкового состава вирусоподобных частиц, также продемонстрировали их сходство с ретровирусами. Мечение интактного очищенного ультрацентрифугированием вируса показало наличие в вирионах белка с молекулярной массой (м. м.), соответствующей 50 000. Обнаружен белок с м. м. 70 000, который обладает свойством связываться с конконовалином А, что свидетельствует о его гликопротеидной природе. Таким же поверхностным гликопротеидом наделен мышиный ретровирус С-типа. Обработка детергентами делает доступным для моделирования еще несколько белков. Белок с м. м. 30 000, который включает наибольшее количество радиоактивной метки, может быть аналогичным большому Р30 сердцевинному белку мышиного вируса С-типа. Остальные белки мышиного ретровируса С-типа имеют молекулярные массы 15 000, 12 000, 10 000. В составе ретровирусных частиц, ассоциированных с псориазом, обнаружены два минорных внутренних полипептида с м. м. 18 888 и 15 000. Не идентифицирован основной белок с м. м. 10 000, соответствующий сердцевинному белку ретровирусов С-типа многих видов животных.
Связывание меченых изотопов белков из клеточной культуры кроличьей гипериммунной сывороткой против очищенных частиц из клеточных культур и мочи больных псориазом, а также из иммунных комплексов, говорит о наличии обоих антигенов в материале из этих трех источников. Антитела против вируса из клеточных культур показали высокую связывающую активность к гликопротеидному антигену. Также эффективно связывались внутренние белковые антигены. Антитела к материалу из частиц, полученных из мочи, связывают те же антигены, но в более низкой степени. Антитела к иммунным комплексам, циркулирующим в крови при псориазе, главным образом связывают гликопротеидный антиген с более высокой эффективностью. Это подразумевает наличие общих антигенных детерминант полипептидной цепи, хотя и не доказывает полную идентичность белков из разных источников.
Также было показано, что антисыворотка к основному внутреннему белку (м. м. 27 000) частиц, выделенных из мочи больных псориазом, реагирует с частицами выделенных из псориатических чешуек папул, крови и синовиальной жидкости.
Обнаружение вирусных частиц в моче и крови больных псориазом не выходит за рамки уже известных фактов относительно ретровирусов. Экспрессия вирусных белков какинтактного вируса в клинически непораженных органах была описана для разных животных, инфицированных различными ретровирусами. Например, экспрессия вируса в почечных клетках обнаружена при лейкозе крупного рогатого скота и медвисна овец.
Интересен тот факт, что от больных псориазом (из крови, мочи, синовиальной жидкости, чешуек) выделены частицы с более высокой плавучей плотностью (1,23 г/см3), чем из клеточных культур (1,16–1,18 г/см3). Это может быть объяснено тем, что в организме больного вирус находится в виде иммунных комплексов с Jg (28), факторов комплемента (28), а также хемотаксических факторов.
При электронной микроскопии материала с более высокой плотностью авторы наблюдали искаженные сферические частицы без четкой идентификации отдельных структур, как вирусов, по внешнему морфологическому виду.
Псориаз – заболевание, характеризующееся повышенной пролиферацией клеток эпидермиса. Несмотря на то что наиболее типичными для ретровирусов являются их трасформирующие потенции, изучению которых уделяется большое внимание, нельзя не согласиться, что довольно часто ретровирусные инфекции вызывают заболевания, характеризующиеся резким увеличением пролиферации клеток без явлений неоплазии, а также хроническими воспалительными расстройствами или иммуносупрессиями. При медленных ретровирусных инфекциях зачастую наблюдается хроническая воспалительная реакция с инфильтрацией мононуклеарных клеток в пораженные органы.
Исходя из сказанного, О.Дж. Иверсен настойчиво доказывает ретровирусную природу псориаза, несмотря на то что попытки обнаружения в составе вирусоподобных частиц РНК-зависимой ДНК полимеразы (обратной транскриптазы) – обязательного компонента полноценных зрелых ретровирусов – не увенчались успехом. Не было обнаружено также присутствия высокомолекулярной РНК ретровирусов. Также не исключена возможность, что ассоциированные с псориазом вирусоподобные частицы являются субклеточными фрагментами, заключенными в плазматическую мембрану, но без геномной вирусной РНК. Кроме того, не показано, играют ли эти частицы этиологическую роль при данном заболевании либо продуцируются в результате каких-либо патологических изменений, вызванных другими агентами.
Было предпринято множество попыток воспроизвести псориаз на животных. Для моделирования заболевания использовали кроликов, морских свинок, мышей. Ряд авторов показали возможность культивирования возбудителя псориаза на хорионаллантоисе куриного эмбриона и на дрожжевых клетках, а также способности «вируса» накапливаться в последних при пассировании.
В качестве инфекционного материала использовали кровь, сыворотку крови, эмульсию и чешуйки из пораженных участков кожи, мочу больных псориазом. Материалы, полученные от больных, вводили животным различными способами: подкожно, внутрибрюшинно, внутритестикулярно.
П.И. Лонг сделал пересадку участка кожи с псориатическими высыпаниями здоровому человеку, после чего высыпания появились на здоровой коже.
Вирусная этиология возможна, и какой-либо агент способен стимулировать рост клеток и, имея вертикальную трансмиссию, мог бы отвечать за характерные особенности этого заболевания. В настоящей работе рассматривается связь псориаза с вирусоподобными субклеточными частицами.
Целью наших исследований является изучение роли вирусов в этиологии псориаза. Работа проводилась на базе Института эпидемиологии и микробиологии Республики Беларусь совместно с кафедрой дерматовенерологии Белорусского государственного медицинского университета под руководством академика РАМН и НАН Белоруссии В.И. Вотякова.
Эксперименты проводились на полученных нами культурах клеток из пораженной кожи больных псориазом и здоровых доноров. Образцы эпидермиса получали с помощью трепана под местным обезболиванием из псориатических бляшек с низким уровнем шелушения. Отбирали больных с распространенной формой псориаза, в семьях, где уже есть случаи заболевания. Кожу для исследования брали у больных, не подвергавшихся лечению.
Культура клеток была получена из псориатических бляшек сорокалетней женщины. Ее семья подвержена псориазу в трех поколениях. Клиническое развитие псориаза произошло к двенадцати годам, и с тех пор ее болезнь была типичной, но умеренной.
Клетки культивировали методом эксплантантов диаметром около 1 мм во флаконах в среде роста 199 производства Института полиомиелита и вирусных инфекций МЗ РФ с добавлением 20 % сыворотки эмбриона крупного рогатого скота (теленка). Контролем служили клетки кожи здоровых доноров, полученных аналогичным образом. Культуры оставляли на 4 недели.
Обнаружено, что клеточные культуры, полученные от больных псориазом, продуцируют в культуральную жидкость структуры, включающие 3Н-уридин – предшественник РНК. При центрифугировании этих структур в градиенте плотности сахарозы оказалось, что они локализуются в зоне плотности 1,16-1,17 г/см3, что характерно для ретровирусов.
Выделенный агент обладал обратно-транскриптазной активностью на экзогенной матрице поли (Ра): олиго (Дш). Электрофорез выделенного агента в полиамидном геле в денатурирующих условиях показал наличие в его составе белков с молекулярными массами (м. м.) соответственно 12:26:30:56:59:68:70 килодальтонами. Агент с таким же белковым составом продуцировался также пассированными культурами лимфоцитов, полученных от тех же больных. Спонтанная продукция агента наблюдалась в течение 20–32 пассажей клеточных культур.
При изучении скорости синтеза ДНК клетками, полученными от больных псориазом и здоровых доноров, оказалось, что синтез ДНК в клетках от больных псориазом в пять раз превышал синтез ДНК в нормальных клетках. Этот показатель строго коррелировал с уровнем продукции агента, имеющего обратнотранскриптазную активность. В культуре клеток из псориатических высыпаний не наблюдалось прямой зависимости между синтезом ДНК и РНК, что характерно для опухолевых клеток.
В клеточных культурах, полученных от больных псориазом, начиная с 4–5 пассажа образуются очаги многослойного роста, которые в 30 % клеточных культур превращаются в фокусы трансформации. На третьи сутки после пересева трансформированные участки отрываются от стекла и приобретают способность существовать в суспензии. Это может быть следствием вызванной вирусом потери клетки, что характерно для многих ретровирусов.
Предварительное испытание действия выделенного агента на животных (новорожденная морская свинка) показало, что введение культуральной жидкости клеток, полученных от пораженной кожи больных псориазом, сходных с подобными морфологическими изменениями, характерно для псориаза (акантоз, паракератоз и пр.). Очаги локализуются в области головы, шеи и спины. Заболеванию подвергаются 60–76 % животных. У 20 % морских свинок наблюдалось развитие опухолей в подчелюстной области. Опухолевой процесс развивался в тех случаях, когда пассаж исследуемого материала проводился более 20 раз.
Подчеркиваем, что только у новорожденной морской свинки были получены такие результаты. При экспериментах на половозрелых животных, которых чаще всего использовали ученые мира в своих многочисленных исследованиях, результаты были иными.
Клинически очаги экспериментального псориаза у морских животных представляли собой округлые или овальные образования 3–8 см в диаметре с явным утолщением кожи, мелкопластинчатым шелушением по всей поверхности очагов. Количество очагов было от 3 до 12 на каждое животное. Без лечения видимые измененные очаги псориаза через 1,5–2 месяца самостоятельно исчезали.
Патоморфологические исследования биопсированной кожи экспериментальных животных были проведены в патоморфологической лаборатории 9-й клинической больницы г. Минска на базе кафедры патологической анатомии Минского государственного медицинского университета. Специалистам был анонимно представлен биопсийный материал, на который было дано заключение, что «в представленных образцах тканей выявлены умеренный акантоз, гиперкеротоз, фокальный паракератоз, крупные микроабсцессы Мунро, занимающие большую часть мальпигиевого слоя и проникающие в роговой; воспалительные явления в дерме в виде расширения капилляров и воспалительный инфильтрат из лимфоцитов и гистиоцитов».
Введение кроликам подкожно концентрированной суспензии вируса, полученной из 6 литров культуральной жидкости клеток больных псориазом, приводило к образованию множественных опухолей в 100 % случаев.
И в опытах с морскими свинками, и в опытах с кроликами инкубационный период заболевания составлял от 30 до 60 дней.
Таким образом, на основании приведенных данных можно утверждать, что выделенный нами агент играет непосредственную роль в этиологии псориаза, однако для окончательного решения этого вопроса требуется ряд дополнительных исследований.
Полученные данные были озвучены на научно-практической конференции дерматовенерологов Белоруссии в мае 1988 г. и на заседании проблемной комиссии союзного значения АМН СССР «Химиотерапия и химиопрофилактика вирусных инфекций, особо опасные и медленные (вирусные) инфекции». Присутствовавшие на заседании проблемной комиссии шесть ведущих вирусологов страны, в частности академик РАМН В.И. Вотяков, профессора Г.А. Галегов, Н.Г. Рытик, В.А. Зуев, С.А. Вичканова и И.Ф. Баринский, единодушно высказались единогласно, что речь идет о неклассической вирусной природе псориаза.
КЛИНИКА И ЛЕЧЕНИЕ БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ ПРЕПАРАТАМИ С ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
Косвенными клиническими подтверждениями вирусной природы псориаза могут служить:
системный характер заболевания;
нередкая связь заболевания с очагами фокальной инфекции;
сочетание острого характера высыпаний с гипертермией;
полиаденит при распространенных формах заболевания;
эксцентрический рост очагов поражения;
разрешение элементов с центра;
поражение волосистой части головы и ногтей;
изменения в опорно-двигательном аппарате по типу ревматоидного артрита;
преобладание осенне-зимней сезонной формы;
трансформация тяжелых форм псориаза в ту или иную форму ретикулеза или грибовидного микоза;
наличие так называемых семейных форм псориаза;
отсутствие выраженных клинических изменений заболевания на протяжении последних двух тысяч (со времени первых описаний заболевания Гиппократом) лет.
Все перечисленные данные позволили ряду авторов утверждать с определенной долей уверенности, что существует специфический возбудитель псориаза.
Накоплен определенный клинический материал по использованию противовирусных препаратов в лечении псориаза. Отмечен положительный терапевтический эффект от интерфероногена, 0,1 %-ной колхаминовой мази, оксолина и адималя, грицина и гризеофульвина, азарибина, метилксантинов, теброфеновой и оксолиновой мази, инъекций ДНК-азы, госсипола, противопсориатической вакцины, коревой вакцины, ингаляции интерферона и др.
Имеются данные и о сочетании псориаза с рядом кожных заболеваний, предположительно имеющих вирусную природу (см. табл. 4).
Т а б л и ц а 4